Chimie / Biochimie
Techniques d'analyse des protéines
Électrophorèse, western blot, chromatographie et protéomique.
Analyse des protéines
Électrophorèse
- SDS-PAGE : SDS dénature et charge négativement toutes les protéines proportionnellement à leur masse → séparation par masse moléculaire uniquement. Gel de polyacrylamide.
- Isoélectrofocalisation (IEF) : séparation selon le pHi. Gradient de pH dans le gel.
- 2D-PAGE : IEF (1re dimension) + SDS-PAGE (2e dimension) → carte protéique.
- Électrophorèse des protéines sériques (clinique) : albumine, alpha-1, alpha-2, beta, gamma-globulines. Pic monoclonal en gamma → myélome.
Western blot (immunoblot)
SDS-PAGE → transfert sur membrane (PVDF/nitrocellulose) → blocage → anticorps primaire (spécifique de la protéine cible) → anticorps secondaire conjugué (peroxydase ou fluorescence) → révélation. Détection spécifique et semi-quantitative.
Chromatographie
- Exclusion de taille (filtration sur gel) : les grosses molécules sortent en premier (exclues des pores).
- Échange d'ions : cationique (résine -) retient les protéines +, anionique (résine +) retient les protéines -. Élution par gradient de sel ou pH.
- Affinité : ligand immobilisé capture spécifiquement la protéine cible. Très sélective (ex : protéine A pour les anticorps, Ni-NTA pour les protéines His-tag).
- HPLC : haute résolution, phase inverse (C18) pour peptides/protéines.
Point clé concours : Le test ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) utilise aussi des anticorps pour détecter/quantifier des protéines (diagnostic VIH, COVID, dosages hormonaux). ELISA sandwich = Ac capture + antigène + Ac détection.
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